有機酸分析柱填充的是聚合物材料,需要特殊的維護。向柱內(nei) 導入以下介紹了的以外的有機溶劑會(hui) 導致聚合物材料膨脹和過度增壓。因此,你應當在安裝柱子以前,先用異丙醇,然後用0.1N的硫酸十分*地衝(chong) 洗管路以*去除有機溶劑。
在使用這個(ge) 有機酸分析柱之前,我們(men) 建議客戶應熟讀有機酸分析柱的使用說明。
有機酸分析柱填充有氫形式的陽離子排斥樹脂,特別開發用於(yu) 在低牙條件下分離包括酒、果汁、奶製品、生物樣品、工業(ye) 原料和環境樣品中的有機酸。
一、洗脫
推薦使用濃度範圍在0.002到0.05N的稀硫酸溶液。大多數的分析使用0.01N的硫酸(pH=±2.3)都可以獲得成功。其他的強酸例如磷酸和高氯酸也可以使用,但是鹵酸例如鹽酸不推薦使用,因為(wei) 它們(men) 會(hui) 腐蝕不鏽鋼。
當有強酸用於(yu) 柱子的洗脫液的時候,柱子就進行了自身再生。所以,特別的再生步驟是不需要的。但是這樣並不能直接對洗提強度和大多數有機酸的保留性質進行校正,較強的洗提強度通常隻減少zui後餾出的化合物的保留時間。
在使用以前,所有的洗脫液都要用0.45μm濾膜過濾和脫氣。對於(yu) 這個(ge) 有機酸分析柱,使用有機相修正,例如乙腈(zui大20%),可以縮短保留時間。這樣做,總是會(hui) 造成背壓的升高。所以,較高的操作溫度和較低的洗提流速通常可用於(yu) 防止產(chan) 生過高壓力。
注意,一旦對柱子使用了有機相修正,柱子就會(hui) 保留使用了有機相修正的洗脫液的色譜特性,即使洗脫液已經恢複到原始的100%的水相,柱子的性質也不會(hui) 回到當初發貨時的狀態了。
因此,如果你的應用中包括有芳香酸或不飽和酸,它們(men) 會(hui) 出現較長的保留時間,我們(men) 推薦使用芳香酸柱(Cat.no.28352),它是專(zhuan) 門設計用於(yu) 此類化合物的。
二、流量和壓力
推薦用於(yu) 有機酸分析柱的流量是0.3-0.8ml/min。任何情況下洗脫流量都不能超過0.8 ml/min,記住柱子壓力產(chan) 生的原因有洗脫流速,柱溫,洗脫液的黏度等等。
要限製洗提流速,使泵壓力不超過2200PSI。在45°C,0.6ml/min流速時,預期的壓力應當在600-1500 PSI之間。如果在此條件下,柱壓超過了1200 PSI,通常指示有汙染物沉積在填充材料上,必須采取改正的措施。
三、樣品準備
保持柱子長壽的關(guan) 鍵是進樣前適當的的樣品處理。你必須防止將脂肪,油脂,蛋白質物質和重金屬離子導入色譜柱,不管是流動相還是樣品。特別地,要禁止導入顆粒雜質。這些zui終都會(hui) 造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。
生物樣品在注射以前必須除去蛋白質。較好的除蛋白試劑是磺基水楊酸。
通常使用的樣品量在10-50微升的範圍內(nei) ,但是進樣高達100微升應當沒有問題。進樣500微升或者更多可能會(hui) 導致峰變寬或者融合。
四、柱前過濾器
柱前過濾器含有0.5-2.0um的多孔不鏽鋼燒結物,安裝在樣品注射器和柱子之間用於(yu) 從(cong) 洗脫液中去除顆粒物。這樣可以防止分析柱產(chan) 生壓力增高的問題,延長柱子的壽命。當有保護柱的時候,柱前過濾器就可以不用了。
五、保護柱
保護柱應當用在這個(ge) 柱上,因為(wei) 樣品和洗脫液汙染可能會(hui) 造成柱壓力的增高。樣品中諸如鹽和蛋白質類的汙染物可能會(hui) 使柱效降低,在注射進柱子以前應當去除。
六、溫度
有機酸分析柱可以在20-90°C使用,提高柱溫會(hui) 改善柱效。然而,柱溫也會(hui) 樣品的保留,所以建議使用柱溫箱以保證得到可以重複的結果。
由於(yu) 某些分離對溫度非常敏感,所以有必要仔細地操控溫度以優(you) 化分離效果。如果在室溫使用這個(ge) 柱子,洗脫流速必須降低保持泵壓不高於(yu) 2200PSI。
七、貯存
有機酸分析柱提供給你的時候使用0.01N的硫酸作為(wei) 平衡。這也是建議的用於(yu) 貯存的洗脫液。柱子在保存的時候,一定要使用提供的螺絲(si) 和墊圈將端口密封。色譜柱必須以這種方式使用和保存,在任何時候都要保證不使柱床幹涸。不正確的貯存(沒有密封)或不正確的使用,會(hui) 導致填充材料部分地幹涸,會(hui) 發生高的柱壓。在這種情形下,可以倒轉柱子,要以0.1ml/min的流速在90°C向柱子泵入0.01N的硫酸。
以上是關(guan) 於(yu) 有機酸分析柱的詳細使用說明,更多內(nei) 容谘詢米兰官方网站下载。
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